C-hepatiidi PCR-analüüs ja tulemuste tõlgendamine

Polümeraasi ahelreaktsioon (PCR) on laboratoorne meetod DNA ja RNA määramiseks. Esmakordselt testis seda peaaegu pool sajandit tagasi ameeriklane Carey Mullis. Selle ülitundliku analüüsi abil on võimalik kindlaks teha genoomi kandja ühe allika molekulist, mis sisaldub veres, süljes või nahas.

PCR-meetodil on suured väljavaated, seda kasutatakse mitte ainult meditsiinis, vaid ka geenitehnoloogias ja kriminalistikas. Selle abil kloonivad nad ja loovad uut tüüpi DNAd, määravad suguluse astme. Kurjategija tuvastatakse epiteeli tükist, mis leiti kuriteopaigalt.

Hepatiidi PCR-analüüs - mis see on ja miks seda teha?

Miks on PCR-analüüs vajalik C-hepatiidi kahtluse korral? Mis see on??

C-hepatiidi viirus - viirust sisaldav RNA, sellel on 6 genotüüpi ja kuni 500 alatüüpi. Kõigist hepatiitidest on sellel viirusel kõrgeim mutatsioonivõime ja see ületab immuunsussüsteemi kaitsebarjääri. Hepatiidiga patsientide koguarvust põhjustas C-viirus 70% kroonilistest juhtudest ja 30% tsirroosist ja maksavähist.

Meetodi olemus: osa uuritud geenist, kasutades spetsiaalseid ensüüme ja tingimusi, on sunnitud in vitro paljunema. PCR-analüüs võimaldab teil kindlaks teha viiruse tüve, ilma milleta pole võimatu tõhusat ravi läbi viia: iga genotüüp on viirusevastaste ravimite suhtes erinevalt tundlik. Kasutatakse kahte tüüpi PCR-i:

Ravi õigeaegseks kohandamiseks tuleb viirusevastast ravi pidevalt jälgida, selleks kasutatakse ka polümeraasi ahelreaktsiooni..

Kvalitatiivne ja kvantitatiivne PCR

C-hepatiidi kvalitatiivne PCR annab vastuse: kas patsiendi veres on C-viiruse tüve ja milline neist. Genotüpiseerimine on vajalik haiguse diagnoosi, prognoosi täpsustamiseks ja ravi aja määramiseks.

Vastavalt aktsepteeritud klassifikatsioonile tähistatakse geeni numbriga ja alatüüpi väikese ladina tähega.

C-viiruse genotüüpide tabeli dešifreerimine:

  • Genotüüp 1a, 1b, 1c
  • Genotüübid 2a, 2b, 2c, 2 d
  • Genotüüp 3a, 3b, 3c, 3d, 3e, 3f
  • Genotüüp 4a, 4b, 4c, 4d, 4e, 4f, 4g, 4 h, 4 i, 4 j
  • 5. genotüüp a
  • Genotüüp 6 a

Kõige tavalisemad genotüübid on 1,2,3. Venemaal on kõige levinumad C-viiruse tüved 1a, 1b, 2 ja 3.

Viiruse 1b genotüüpi on teistest raskemini ravitav: 90% juhtudest muutub see krooniliseks, millest 30% degenereerub vähiks või maksatsirroosiks.

Genotüüpide 2a ja 3a kroniseerumisaste on 33-50%, nad reageerivad paremini viirusevastasele ravile.

Viiruse esinemise kinnitamisel viiakse läbi C-hepatiidi kvantitatiivne PCR, mille abil arvutatakse patsiendi laboriproovis RNA-molekulide arv.

Analüüsi dekrüptimine

Kvalitatiivsel PCR-analüüsil on kaks vastust:

Negatiivne PCR tähendab, et vereproovides pole patogeeni tuvastatud.
Positiivne vastus näitab vastupidist: tuvastati viiruse C ühe või teise genotüübi RNA.

Tulemuse usaldusväärsuse tõenäosus on 95%. Ülejäänud 5% on inimese põhjustatud viga. See võimalus on lubatud uuringu kõrgete nõuete tõttu:

  • reaktiivide ladustamise reeglid;
  • meditsiinitöötajate asjakohane kvalifikatsioon;
  • biomaterjali puhtus.

PCR-komplektil on 100% diagnostiline täpsus.

C-hepatiidi RNA kvantitatiivne PCR võimaldab teil määrata viiruse koormuse patsiendi kehas. Tema abiga:

  • haiguse staadium on täpsustatud (äge, krooniline);
  • määratakse viirusevastase ravi efektiivsus;
  • selgub, et on vaja maksa biopsiat.

Mõnel juhul ei tunne patsient mingeid haiguse tunnuseid, samal ajal kui HCV nakkus tuvastati PCR abil. See tähendab, et haigus on varases arengujärgus või kroonilises vormis. Diagnoosi täpsustamiseks on viirusevastase ravi varaseks alustamiseks vaja läbi viia täiendavad uuringud.

C-hepatiidi viiruskoormus

Viirusekoormus näitab maksa viiruse aktiivsust, kui aktiivselt selle paljunemine toimub..

Mis see on?

C-hepatiidi kvantitatiivset PCR-i mõõdetakse rahvusvahelistes ühikutes 1 ml või RÜ / ml kohta, mis tähendab, kui palju viiruse C spetsiifilise tüve ribonukleiinhappe koopiaid tuvastatakse 1 ml testitavas veres.

Mida peetakse kõrgeks, mida madalaks?

Viiruse koormuse analüüs võimaldab teil kindlaks teha viiruse RNA olemasolu kontsentratsioonis 50 RÜ / ml. Viirusekoormus on normaalne, kui PCR-i ei tuvastata ühtegi HCV RNA molekuli.

Viirusekoormuse tabel:

  • madal - kontsentratsioon alates 600 RÜ / ml 3 * 104 RÜ / ml;
  • keskmine - kontsentratsioon 3 * 104 RÜ / ml kuni 8 * 105 ME;
  • kõrge tase üle 8 * 105 RÜ / ml.

Madal viirusekoormus on signaal, et terapeutiline ravi on valitud õigesti ja C-hepatiidi raviprognoos on soodne.

Viirusrakkude kõrge kontsentratsioon näitab, et haigus on ägedas faasis. Patsiendi veri on ohtlik nakkusallikas.

Viirusekoormus, mille näitajad on keskmisel tasemel, iseloomustab kas sooja vee soojenemist kroonilises staadiumis või sellel võib olla kaks arengusuunda: selle suurendamine või vähendamine.

Selle lõpp - 6 kuu möödudes on kontroll-PCR tehtud.

PCR-diagnostika maksumus

Järgmised sümptomid peaksid muretsema:

  • üldine nõrkus;
  • naha, silmakõrva, eritiste värvus;
  • iiveldus;
  • söögiisu vähenemine;
  • lihas- ja liigesevalu;
  • raskustunne paremas hüpohondriumis;
  • kõrgenenud ASAT ja ALAT sisaldus veres.

Nakatunud patsientidega kokkupuutel ja operatsioonieelsel perioodil koos hemodialüüsiga on soovitatav ka uuring..

Riigikliinikud teevad PCR vereanalüüsi tasuta, kui nakkushaiguste spetsialisti või hepatoloogi saatekiri on olemas.

Tasulisi PCR-diagnostika teenuseid pakutakse kõigis Venemaa suuremates linnades. Maksumus sõltub testi tüübist, olemasolevatest seadmetest, ajastusest ja muudest teguritest..

Kvaliteetne PCR-analüüs Moskvas ja Peterburis maksab 600 kuni 900 rubla. Regioonides - 300 kuni 800 rubla.

C-hepatiidi viiruskoormuse määramine maksab 17 000 - 22 000 rubla. Muud tüüpi nakkuste korral on kvantitatiivse uuringu hind: 1200-10000 rubla.

PCR-meetodi eelised ja puudused

Millised on polümeraasi ahelreaktsiooni meetodi eelised võrreldes teiste diagnostiliste meetoditega??

  1. Lai valik rakendusi. PCR-i abil ja standardvarustusega saate tuvastada mis tahes viiruse.
  2. Patogeeni määramise täpsus. Erinevate ensüümide kombinatsioonide ja analüüsimeetodi abil saavutatakse näidustatud infektsiooni 100% -line uuringuspetsifikatsioon..
  3. Suur tundlikkus. Meetod võimaldab tuvastada ühe viiruse molekuli olemasolu veres.
  4. Tõhusus Kvalitatiivne analüüs on valmis mõne tunniga, kvantitatiivne - kahe päevaga.
  5. Viiruse diagnoosimine inkubatsiooniperioodil. PCR-is ei määra patogeeni mitte antikehade olemasoluga, kui organismil on juba immuunvastus, vaid enne patoloogilise protsessi algust, mis hõlbustab ravi.

PCR-i puudused tulenevad selle eelistest:

  • analüüsi puhtus nõuab laboratooriumis kõrgeimat puhtuseastet, sealhulgas õhku, nii et “võõras” DNA ei satuks uuritavasse proovi;
  • kõrged nõuded personali proovide võtmisele ja biomaterjalide analüüsimisele.

C-hepatiidi PCR

PCR - kaasaegne C-hepatiidi diagnoos

C-viirushepatiit on üks maksa salakavalamaid haigusi. Pikka aega on see asümptomaatiline, mis viib kroonilise protsessini (80% -l). Enamikul juhtudest lõpeb see maksa fibroosiga, mis voolab maksatsirroosiks või elundite turseks.

Eriti olulised on haiguse varase diagnoosimise meetodid. Polümeraasi ahelreaktsioon (PCR) võimaldab teil diagnoosida paar päeva pärast nakatumist.

Lühidalt C-viirushepatiidist

Patogeen - RNA, mis sisaldab viirust, millel on mitu alamtüüpi. Tungib inimkehasse vere kaudu: seksuaalselt, vereülekande, süstimise ja muude invasiivsete meditsiiniliste protseduuride kaudu.

Haiguse ägedal kujul pole olulisi sümptomeid. Mõnikord on parempoolses hüpohondriumis raskus, mida enamik patsiente ei märka.

Krooniline vorm viib kõigi maksafunktsioonide rikkumiseni: joobeseisund, kõhuvalu, kollatõbi, liigesevalu ja paljud teised. Sel hetkel muutub protsess pöördumatuks..

Sageli muutub krooniline C-hepatiit maksakoe pahaloomulise degeneratsiooni eelkäijaks.

PCR-meetodi olemus

PCR abil määratakse viiruse RNA juba 5 päeva pärast nakatumist. Sel perioodil pole immuunvastust veel käivitatud, seroloogilise testi tulemused on negatiivsed, kliinilised sümptomid puuduvad täielikult.

Just PCR-diagnostika võimaldab diagnoosi panna haiguse varases staadiumis, kui piisav ravi parandab oluliselt patsiendi prognoosi. PCRi on kahte tüüpi - kvalitatiivne ja kvantitatiivne.

Kvaliteeditehnika

Tuvastab C-hepatiidi viiruse geneetilise materjali minimaalses koguses. Tulemus on kahte tüüpi:

  1. "Avastatud" - positiivne reaktsioon, mis näitab haiguse esinemist inimestel.
  2. Ei tuvastatud - negatiivne analüüs, mis näitab nakkuse puudumist või viiruse esinemist sellistes väikestes kogustes, mida selle meetodiga ei määrata. See ei anna 100% tõenäosust, et patsiendil pole C-viirushepatiiti.

Analüüsiks kasutatakse kõige sagedamini verd, kuid sobivad on ka sülg, seemnevedelik ja muud bioloogilised vedelikud..

C-hepatiidi PCR

Kvantitatiivne tehnika

See on keerulisem ja kallim meetod, mida viiakse läbi vastavalt teatud näidustustele:

  1. Diagnoosi kinnitamine positiivse kvalitatiivse PCR-ga ja spetsiifiliste antikehade tuvastamine.
  2. Kombineeritud viiruspatoloogia korral (C-hepatiidi viirus "külgneb" sageli samadel viisidel leviva B-hepatiidiga).
  3. Teraapia efektiivsuse jälgimine. Selleks uurige välja vireemia tase enne ravi, seejärel 4, 12, 24 ravinädalal. Kui 12 nädala pärast ei vähene viiruse sisaldus kahe logaritmilise ühiku võrra, valitakse ravim valesti.
  4. Ägedast kroonilisse ülemineku diagnoosimine.

Viiruseühikute arv arvutatakse testitava vedeliku mahuühiku kohta (tavaliselt 1 ml). Tulemust väljendatakse RÜ / ml või viiruse RNA koopiate arvuga 1 ml.

See näitab keha viiruskoormuse intensiivsust. Mida suurem on see väärtus, seda suurem on tõenäosus viirust teistele inimestele edastada. Maksakahjustuse raskusaste ei sõltu vireemia tasemest. Selleks on arvukalt niinimetatud maksateste..

Uuringu ettevalmistamine

Enamik valenegatiivseid analüüse tuleneb analüüsitehnoloogia eiramisest. Selle vältimiseks tuleb järgida järgmisi reegleid:

  1. Välistage saasteainete sattumine biomaterjali täielikult (steriilsuse tingimused).
  2. Hepariini minimaalne kontsentratsioon veres, mida kasutatakse hüübimise ärahoidmiseks või määratakse patsiendile raviotstarbel, mõjutab PCR-i tulemust. Oluline on see küsimus eelnevalt patsiendiga selgeks teha..
  3. Vältige keskkonnast mis tahes aineid, mis neutraliseerivad ensüüme PCR-katsesüsteemides.

Kõik need nõuded on seotud laboriassistentide ja arstide tegevusega. Patsient ei pea spetsiaalselt ette valmistama. Tavaliselt loovutavad nad verd tühja kõhuga, välistavad alkoholi.

PCR eelised

C-hepatiidi põhjalikul uurimisel on polümeraasi ahelreaktsioon esiteks mitmete eeliste tõttu:

  1. Patogeeni otsene isoleerimine võimalusega tuvastada selle alatüüp. Muudel juhtudel (seroloogilised reaktsioonid) uuritakse immuunsüsteemi reageerimist viirusele..
  2. Tehnika kõrge eripära. Valepositiivsete või valenegatiivsete tulemuste saamise tõenäosus on viidud miinimumini (peamiselt juhul, kui on rikutud uuringutehnoloogiat).
  3. Suur tundlikkus. Enamiku laborite ja katsesüsteemide tundlikkus on vähemalt 50 RÜ / ml. On olemas ultra-PCR, kus see arv on 10 RÜ / ml. See tähendab, et C-hepatiidi viirust on võimalik nakatumise esimestel päevadel tuvastada..
  4. Universaalsus. PCR-ga tuvastatakse viivitamatult mitu hepatiidi patogeeni, kui neid on.

TÄHTIS! Viirused, mille genotüüp on väga varieeruv (C-hepatiit, gripp), ajab immuunsussüsteemi segadusse, mis põhjustab seroloogiliste testide (spetsiifiliste antikehade tuvastamise) häguseid näitajaid. Ainult PCR annab täpse vastuse patogeeni genotüübi olemasolu kohta kehas.

Tulemuste tõlgendamine

C-hepatiidi PCR viiakse tavaliselt läbi pärast antikehade seroloogilisi teste. Patsientide jaoks on kõige raskem meetodi kvantitatiivse versiooni tõlgendamine. Proovime selle välja mõelda..

Kui tulemus on esitatud RÜ / ml, kirjeldatakse tulemusi järgmiselt (andmed on esitatud Venemaa seadmete ja katsesüsteemide kohta):

Viirusliku RNA kogusTõlgendamine
Ei tuvastatudNorm (muude kliiniliste või laboratoorsete tunnuste puudumisel) või viiruse hulk, mis on alla selle meetodi tundlikkuse läve
Vähem kui 1,5 x 10 3See arv on "alla lineaarse vahemiku", mis tähendab patogeeni esinemist kehas, kuid ilma viiruskoormuse kvantitatiivse kirjeldamise võimaluseta
Vähem kui 4 x 10 6Tuvastatud viiruse RNA, vireemia madal (prognoos on soodne)
Rohkem kui 4 x 10 6Tuvastatud viiruse RNA, vireemia kõrge
Rohkem kui 2 x 10 8Kontsentratsioon on kõrge, üle lineaarse vahemiku, mis tähendab väga suurt viirusekoormust, mida tänapäevased mõõtevahendid ei kirjelda (ebasoodne prognoos).

Tabelis on toodud ainult ühe Venemaa testisüsteemi versiooni tõlgendamise võimalus. Iga labor saab kasutada oma seadmeid, mis annab väärtustele erinevuse. Tavaliselt väljastatakse tulemus kas valmis dekodeerimisega või näidates normaalväärtuste piire.

PCR-i tõlgendamise tunnused

Ravi alustamise aeg sõltub analüüsitulemuste korrektsest tõlgendamisest, mis on C-hepatiidi korral patsiendi jaoks ülioluline.

Analüüsitulemuste dekodeerimist mõjutavad mitmed tegurid:

  • Seadmete kvaliteet ja katsesüsteemide tundlikkus. Praeguseks on kõige levinumad Cobas Ampicolor HCV-Test ja RealBest HCV RNA. Nende tundlikkus on vähemalt 50 RÜ / ml. See tähendab, et kui viirus on madalamas kontsentratsioonis (näiteks nakatumise esimestel päevadel), on testi tulemus negatiivne ja haigus progresseerub ilma ravita. Hiljuti on ilmunud ülitundlikud diagnostikasüsteemid (vähemalt 10 RÜ / ml). Need parandavad märkimisväärselt diagnoosimise kvaliteeti. Sellise PCR-i maksumus varieerub suuresti - sõltuvalt laborist vahemikus 1800 kuni 10 tuhat rubla.
  • Lõplik diagnoos tehakse alles pärast kolme erinevat bioloogilise vedeliku uuringut. Kui tulemus on kolm korda negatiivne, siis patsiendi kehas C-hepatiidi viirust ei esine.
  • Edukaks raviks on vaja mitte ainult kinnitada viirusega nakatumise fakti, vaid ka kindlaks teha selle alatüüp: 1a, 1c, 2a, 2c, 2c, 3, 4, 5a, 6.
  • Tulemusi hinnatakse kahes ühikus: ME / ml ja RNA koopiate arv / ml. Nende arv erineb täpselt 4 korda, mida peate analüüsi tulemuste kättesaamisel meeles pidama.

C-viirushepatiidi PCR-reaktsiooni tõlgendamist peaksid läbi viima spetsialistid. Arst mõistab kvantitatiivseid näitajaid ja oskab võrrelda laboratoorsete tulemuste vastavust kliinilisele pildile.

Mõnikord on valepositiivseid või valenegatiivseid testimisvõimalusi ja ainult patsiendi igakülgne uurimine võimaldab teil seda kõige tõsisemat maksahaigust mitte maha jätta..

HCV, RNA [reaalajas PCR]

C-hepatiidi (HCV) põhjustaja tuvastamiseks mõeldud uuring, mille käigus tuvastatakse reaalajas polümeraasi ahelreaktsiooni (RT-PCR) meetodi abil viiruse geneetilise materjali (RNA) olemasolu veres.

C-hepatiidi viirus (HCV), RNA kvalitatiivne määramine.

Sünonüümid inglise

C-hepatiidi viirus, RNA, veri, HCV RNA, reaalajas PCR, kvalitatiivne.

Reaalajas pöördtranskriptsiooni polümeraasi ahelreaktsioon.

Tuvastab HCV genotüübid: 1a, 1b, 2a, 2b, 2c, 2i, 3, 4, 5a, 6.

Määramise eripära: 100%.

Määramise tundlikkus: 50 RÜ / ml.

C-hepatiidi viiruse RNA kontsentratsioonide lineaarne vahemik, mis määrati katsesüsteemi abil: 150–1 * 10 ^ 8 RÜ / ml.

Millist biomaterjali saab uurimiseks kasutada?

Kuidas uuringuks valmistuda??

  • Enne uuringut ei tohi suitsetada 30 minutit.

Uuringu ülevaade

C-hepatiidi viirus (HCV) - RNA-d sisaldav viirus Flaviviridae perekonnast, mis nakatab maksa. See võib paljuneda vererakkudes (neutrofiilid, monotsüüdid ja makrofaagid, B-lümfotsüüdid) ja põhjustada krüoglobulineemiat, Sjogreni tõbe ja B-raku lümfoproliferatiivseid haigusi. Tänu kõrgele mutatsioonilisele aktiivsusele saab HCV vältida immuunsussüsteemi kaitsemehhanismidega kokkupuudet. Viirusel on 6 genotüüpi ja paljusid alatüüpe, millel on haiguse arengu ja viirusevastase ravi efektiivsuse ennustamiseks erinev tähendus..

Nakkuse peamine edasikandumisviis toimub vere kaudu (vere- ja plasmaelementide ülekandmiseks mõeldud ravimid, doonororganid, mittesteriilsed süstlad, nõelad, tätoveerimise tööriistad, augustamine). Nakatumine seksuaalse kontakti ja emalt sünnituse ajal on tõenäoline, kuid seda juhtub harva.

Ägedat viirushepatiiti iseloomustab reeglina asümptomaatiline kulg ja see jääb enamikul juhtudel avastamata. Ainult 15% -l nakatunud inimestest on haigus äge - iivelduse, kehavalude, isupuuduse ja kehakaalu langusega (millega kaasneb harva kollatõbi). 60–85% nakatunud inimestest areneb krooniline infektsioon, mis on 15 korda kõrgem kui hepatiit B krooniline sagedus. Krooniline viirushepatiit C tekib maksaensüümide arvu suurenemise ja nappide sümptomite korral. 20–30% -l patsientidest põhjustab haigus tsirroosi, suurendades maksapuudulikkuse ja hepatotsellulaarse kartsinoomi riski.

HCV RNA tuvastamine näitab viiruse paljunemist kehas ja aitab haigust diagnoosida. Viiruse geneetilist materjali saab PCR-iga tuvastada 10–12 päeva pärast nakatumist - sel perioodil puuduvad spetsiifilised antikehad, mis tekivad mitu kuud pärast nakatumist, ja maksafunktsiooni biokeemilised parameetrid jäävad kontrollväärtuste piiresse. Kõrge spetsiifilisuse ja tundlikkusega C-hepatiidi viiruse RNA määratakse kvalitatiivselt või kvantitatiivselt. Tänu kvalitatiivsele meetodile kinnitatakse viiruse nakatumise või surma fakt. See on eriti oluline nakkusohus olevate inimeste viirushepatiidi varajases diagnoosimisel, samuti viirusevastase ravi jälgimisel. Alfa-interferooniga ravimisel on selle efektiivsuse kriteeriumiks viiruse RNA puudumine 24 nädalat pärast ravi lõppu.

Milleks uuringut kasutatakse??

  • C-viirushepatiidi varajaseks avastamiseks.
  • Hepatiidi diferentsiaaldiagnostika jaoks.
  • Viirusevastase ravi efektiivsuse jälgimiseks.
  • C-viirushepatiidi kulgu jälgimiseks.
  • Doonori vere kontrollimiseks.

Kui uuring on planeeritud?

  • Seroloogilise uuringu kahtlaste tulemustega.
  • C-hepatiidi nakkuse riskirühma kuuluvate inimeste uurimisel.
  • Kui laps sündis nakatunud emast.
  • Hepatiidi sümptomitega ja maksafunktsiooni suurenenud biokeemiliste parameetritega.
  • Enne ravi ja ravi lõpus, seejärel pärast 6 ja 24-kuulist vaatlust.

Mida tulemused tähendavad??

Kontrollväärtused: ei tuvastatud.

Positiivse tulemuse põhjused

Negatiivse tulemuse põhjused

  • C-hepatiidi viiruse puudumine uuritava veres.

Mis võib tulemust mõjutada?

Valenegatiivse tulemuse põhjused:

  • minimaalne vere viiruskoormus (50 RÜ / ml);
  • inhibiitorite olemasolu proovis - keemilised ja valguained, mis mõjutavad PCRi erinevaid komponente;
  • hepariini olemasolu veres;
  • kõrge vere krüoglobuliinid.
  • C-hepatiidi viiruse RNA olemasolu iseenesest muude laboratoorsete parameetrite muutuste puudumisel ei võimalda nakkust absoluutselt kindlalt diagnoosida. Sel juhul on vaja viiruse RNA uuesti identifitseerida PCR abil ja kõigi uuringute põhjalik hindamine. Kroonilise C-hepatiidi korral muutub viiruse RNA kontsentratsioon lainetes - positiivsed ja negatiivsed tulemused võivad vahelduda, mis nõuab diagnoosi ja ravi taktika selgitamiseks maksa biopsiat.
  • Viiruse paljunemise aktiivsuse ja maksafunktsiooni biokeemiliste parameetrite muutuse vahel puudub otsene seos.

Kes määrab uuringu?

Kirjandus

  • Vozianova J.I. Nakkus- ja parasiithaigused: kolmes köites - K.: Tervis, 2000 - T. 1.: 600-690.
  • Kishkun A.A. Immunoloogilised ja seroloogilised uuringud kliinilises praktikas. - M.: MIA LLC, 2006. - 471–476 s.
  • Harrisoni sisehaiguste põhimõtted. 16. toim. NY: McGraw-Hill; 2005: 1822-1855.
  • Lerat H, Rumin S, Habersetzer F jt. C-hepatiidi viiruse genoomsete järjestuste in vivo tropism vereloome rakkudes: viiruse koormuse, viiruse genotüübi ja raku fenotüübi mõju. Veri 1998, 15. mai; 91 (10): 3841-9.PMID: 9573022.
  • Revie D, Salahuddin SZ. Inimese rakutüübid, mis on olulised C-hepatiidi viiruse replikatsiooniks in vivo ja in vitro: vanad väited ja praegused tõendid. Virol J. 2011 11. juuli; 8: 346. doi: 10.1186 / 1743-422X-8-346. PMID: 21745397.

C-hepatiidi PCR-analüüs

C-hepatiit läheb ägedast krooniliseks 80% juhtudest. Patogeensete viiruste replikatsioon funktsionaalsetes maksarakkudes põhjustab organite talitlushäireid. See on tingitud asjaolust, et parenhüümi kude asendatakse sidekoega. Selle tagajärjel täiendavad patsiendi anamneesi verejooks seedetraktis, keha joobeseisund, vere hüübivuse probleemid. Seetõttu mida varem diagnoositakse patoloogilisi muutusi, seda suuremad on patsiendi võimalused taastumiseks. C-hepatiidi PCR-analüüsi peetakse kõige täpsemaks uurimismeetodiks..

Seda diagnostilist meetodit lubatakse läbi viia mitu päeva pärast nakatumist. Polümeraasi ahelreaktsioon võimaldab teil usaldusväärselt kindlaks teha viiruse genotüübi ja kontsentratsiooni veres. Analüüsi tegemiseks võtab patsient bioloogilise materjali, milles võib esineda patogeeni RNA.

C-hepatiidi PCR viiakse läbi kolmes etapis:

  • Kvalitatiivne analüüs - tema abiga määratakse patogeeni geneetiline materjal.
  • Kvantitatiivsed uuringud - selgub seega viirusekoormus.
  • Genotüpiseerimine - selles etapis tuvastab arst haiguse tüübi.

Tehnika töötati välja umbes 30 aastat tagasi. Seda kasutatakse paljude nakkushaiguste diagnoosimiseks. PCR võimaldab tuvastada ainulaadset geneetilist materjali. Selleks kasutatakse praimereid. Nn RNA lühikesed ahelad, mis kinnituvad geeni algusesse.

Selle tagajärjel suureneb patogeense viiruse fragmentide arv mitu korda. Iga faas nõuab spetsiaalset temperatuurirežiimi ja teatud ajaperioodi. DNA molekul moodustub 3 minuti jooksul. Amplifikatsioon hõlmab umbes 30 tsüklit. PCR tehakse laboris spetsiaalsete seadmete abil.

Näidustused ametisse nimetamiseks

PCR-analüüs võib olla tingitud C-hepatiidi kliinilistest sümptomitest. Protseduur on näidustatud inimestele, kes:

  • nakatunud inimesega ühenduse võtmine;
  • kannatavad ägedate ja krooniliste maksahaiguste all;
  • parenhüümi koe patoloogiliste muutuste ravi;
  • on ohus;
  • on vere ja selle komponentide doonorid.

PCR viiakse läbi mitte ainult C-hepatiidi korral. Analüüsi kasutatakse meditsiinis, bioloogias ja kriminalistikas. Spetsiifiliste näitajate määramine - etapp, mis on vajalik ravimirežiimi valimiseks.

Analüüsi eelised

Diagnostilise uuringu ajakava sisaldab immunofluorestsentsanalüüsi ja PCR-i. Esimest kasutades saate määrata immunoglobuliinide kontsentratsiooni. Neid aineid toodetakse kaitsemehhanismi abil pärast patogeensete viiruste tungimist kehasse. Erinevalt PCR-st ei ole ELISA inkubatsiooniperioodil efektiivne. Polümeraasi ahelreaktsiooni abil saab C-hepatiidi tuvastada esimese 7 päeva jooksul pärast nakatumist..

Sellel kliinilisel uuringul on järgmised omadused:

  • Vale tulemuse minimaalne tõenäosus.
  • Kõrge efektiivsusega.
  • Spetsiifilisus.
  • Tundlikkus.
  • Mitmekülgsus.
  • Protsesside automatiseerimine.
  • Ohutus.
  • Indikaatorite saamise kiirus.

PCR-i ainus puudus on selle tehniline keerukus. See on tingitud asjaolust, et arst peab valima õige nukleotiidide koostise, mille funktsioonides toimub DNA süntees. Meetodi suurenenud tundlikkuse tõttu on võimalik saada valepositiivseid või valenegatiivseid tulemusi.

Oluliste näitajate täpsuse saavutamiseks puhastatakse bioloogiline materjal ravimitest ja valguühenditest põhjalikult. Tulemuse kinnitamiseks on vaja eelnevalt testitud proove võrrelda. Viga provotseerivad tegurid on järgmised:

Proovianalüüsi tehnika rikkumine

  • Proovianalüüsi tehnika rikkumine.
  • RNA fragmentide järjestuse muutused.
  • Patogeensete viiruste sünteesitud nukleotiidide ja geenide kokkulangevus.

C-hepatiidi korral vale tulemuse saamise tõenäosus on tingitud võimetusest kindlaks teha haiguse geneetilist alust. PCR-diagnoos võimaldab patogeeni otseselt tuvastada. DNA amplifikatsioon tuvastab patogeenid toidus, vees ja pinnases.

Selle meetodi piirangud ei vähenda selle tõhusust ja populaarsust. Regulaarselt viiakse läbi kliiniline uuring. Seega saab arst hinnata võetud ravimeetmete tõhusust. Vajadus selle järele on tingitud asjaolust, et C-hepatiidi viirus on võimeline muteeruma. Positiivse efekti puudumine tähendab viiruse kohanemist kasutatud ravimitega.

Ettevalmistus sünnituseks

Polümeraasi ahelreaktsiooni läbiviimiseks C-hepatiidi all kannataval patsiendil võetakse venoosne veri. Tavaliselt on uurimiseks vaja kahte portsjonit bioloogilist materjali. Ühe kaudu tehakse PCR otse ja teine ​​saadetakse ensüümi immuuntesti saamiseks.

PCR-analüüsi jaoks võetakse veri veenist

Suur tähtsus on ettevalmistamisel. Patsient annetab verd PCR-i jaoks hommikul tühja kõhuga. Mõni päev enne protseduuri peate loobuma kahjulikust toidust, alkoholist, nikotiinist ja ravimitest. Patsient peaks vältima seksuaalset kontakti, liigset füüsilist ja emotsionaalset stressi. Bassein ja spordisaal on keelatud. Peate niikuinii valmistuma.

Ravimite kohta on olemas spetsiaalsed juhised. See kehtib antibiootikumide ja antidepressantide kohta. Menstruatsiooni alustanud naised peaksid C-hepatiidi testimise edasi lükkama. Kolposkoopia on ka põhjus protseduurist keeldumiseks..

Loetletud reeglid on üsna lihtsad. Tänu neile on võimalik saavutada selle diagnostilise meetodi maksimaalne usaldusväärsus. Tulemuste dešifreerimine peaks olema spetsialist. On ebatõenäoline, et patsient suudab neid iseseisvalt tõlgendada.

Analüüsiprotsess

PCR-diagnoos on järgmine:

Veri pannakse termostaadi

  • Esiteks võetakse bioloogiline materjal. Veri pannakse steriliseeritud seadmetesse. Vajalik maht ei ületa 1-1,5 ml. Hoidke verd ja selle komponente ei tohiks olla kauem kui 24 tundi. Säilitustemperatuur ei tohiks ületada 4 kraadi Celsiuse järgi.
  • Pärast kliinilise uuringu alustamist. Valmistatud veri pannakse koos võimendusseguga termostaati. Tavaliselt ei vaja spetsiaalset kompositsiooni rohkem kui 25 ml. Amplifikatsioon toimub automaatselt mitu tundi.
  • Paralleelselt tehke kontrollteste. Selleks kasutage tervislikult inimeselt võetud bioloogilisi materjale. See aitab vältida valesid tulemusi..
  • Indikaatorite dekodeerimine ja registreerimine. Geneetiline materjal tuvastatakse etiidiumbromiidi abil. Spetsiifilise efekti tõttu tõstetakse esile DNA fragmente. Viiruse olemasolu (puudumine) tuvastatakse andmetabeli alusel.

Tulemuste dešifreerimine

Ainult nakkushaiguste spetsialist ja hepatoloog saavad kindlaks teha saadud näitajate väärtuse. PCR-analüüs tutvustab diagnostilist kompleksi koos biokeemilise vereanalüüsi, ultraheli, ELISA ja biopsiaga. Diagnoos põhineb kõigil tulemustel. Analüüside dešifreerimise protseduur sõltub diagnostilise uuringu staadiumist.

PCR-i esimeses etapis peetakse patogeense viiruse DNA fragmentide tuvastamist positiivseks testi tulemuseks. Kvantitatiivse analüüsi tegemisel määratakse viiruse koormus. See võib olla madal (vähem kui 8 * 10 ^ 5 RÜ / ml), keskmine (alates 8 * 10 ^ 5 RÜ / ml), kõrge (üle 2,4 * 10 ^ 7 RÜ / ml). Norm (negatiivne tulemus) on spetsiifiliste antikehade ja viirusliku RNA osakeste puudumine. Genotüpiseerimise etapis näitab teatud genotüübi RNA nakkuslikku infektsiooni.

Positiivse tulemuse saamisel määratakse patsiendile efektiivne raviskeem. Sellisel juhul tuleb arvestada viiruse olemasolu veres, selle aktiivsuse määra ja genotüübiga. Protseduuri hind sõltub katsetamise metoodikast, bioloogilise materjali tüübist. Kogumaksumusele võib lisada vere või muude vedelike võtmise kulud. Viimane on tingitud asjaolust, et patogeeni leidub sageli uriinis, väljaheites ja spermas.

C-hepatiidi PCR-diagnoos

HCV-nakkust (C-hepatiiti) iseloomustab pikaajaline asümptomaatiline kulg. Seetõttu tuvastatakse haigus juba kroonilise protsessi või maksa tsirroosi staadiumis. C-hepatiidi PCR võimaldab diagnoosida patoloogiat varases staadiumis, õigeaegselt välja kirjutada piisav ravi ja vältida selle progresseerumist.

Näidustused laboratoorseks uuringuks

Polümeraasi ahelreaktsiooni kasutav uuring nõuab keerukaid seadmeid ja spetsiaalselt koolitatud personali, mis toob kaasa selle kõrge hinna. Seetõttu, kui kahtlustate HCV-viiruse esinemist, saadetakse patsient kõigepealt ensüümidega seotud immunosorbentanalüüsi tegema. Kui ELISA on positiivne ja hepatiidi antikehi oli võimalik tuvastada, saadetakse inimene PCR-ile. Selle tehnika abil kontrollitakse lisaks järgmisi meetodeid:

  • meditsiinitöötajad ja kosmeetikud, kes puutuvad kokku hepatiidihaigete verega;
  • inimesed, kes seksivad sageli võõraste partneritega ja harrastavad kaitsmata seksi;
  • narkomaanid, kes süstivad narkootikume;
  • patsiendid, kellel on sageli invasiivsed diagnostilised või terapeutilised protseduurid;
  • AIDSiga patsiendid, vähihaiged;
  • inimesed pärast spontaanset kokkupuudet lahtise haava pinnaga, võõra vere või mittesteriilsete meditsiiniinstrumentidega;
  • need, kellele tehti siirdamine või vereülekanne enne 1992. aastat (kui usaldusväärseid meetodeid viiruse määramiseks doonormaterjalides ei olnud).

Hepatiidi PCR-diagnoosimine on raseduse I ja III perioodil kohustuslik. Sageli leitakse HIV ja C-hepatiidi kombinatsioon, mistõttu riskirühma kuuluvatele patsientidele määratakse mõlemat tüüpi analüüs.

Testimine on näidustatud ka vastsündinutele, kui ema on nakatunud viirushepatiiti. Enne mõnda operatsiooni läbivad patsiendid ensüümidega seotud immunosorbentanalüüsi ja vajadusel PCR-i. Kui biokeemilises vereanalüüsis tuvastatakse rakusiseste ensüümide AlAT (alaniinaminotransferaas) ja AsAT (aspartaataminotransferaas) kõrgenenud tase, on näidustatud PCR-uuringud.

Põhjalike uuringute näidustused on kollatõbe viitavad sümptomid. Preicteric perioodil ilmnevad patsientidel järgmised sümptomid:

  • asthenovegetatiivne sündroom: nõrkus, väsimus;
  • düspeptilised häired: iiveldus, oksendamine, ebamugavustunne paremas hüpohondriumis;
  • söögiisu vähenemine;
  • artralgiline sündroom - episoodiline liigesevalu;
  • sügelev nahk.

Icteric perioodil ilmnevad lisaks ülaltoodule ka muud sümptomid:

  • peavalu;
  • pearinglus;
  • laienenud maks ja põrn;
  • ämblikveenid;
  • peopesade ja jalgade punetus (mõnikord).

Kui ilmneb 1 või enam sümptomit, pöörduge kohe hepatiidi arsti poole, et planeerida uuring.

Kuidas analüüsi teha

C-hepatiidi uurimiseks võetakse biomaterjal, milles on võimalik tuvastada nakkusetekitaja DNA või RNA. Objektiivse tulemuse saamiseks peab patsient järgima vereproovide ettevalmistamise reegleid.

Eksami ettevalmistamine

C-hepatiidi PCR-analüüsi tulemuste mitte moonutamiseks peate:

  • järgige enne analüüsi 2 päeva dieeti nr 5 - ärge sööge rasvaseid, praetud, vürtsikaid, marineeritud roogasid;
  • 2 päeva kohvist, magusatest gaseeritud jookidest, alkoholist ja mahladest loobumiseks;
  • lõpetage ravimite võtmine päevas ja kui need on ülitähtsad, peate teatama spetsialistile teraapiast ja ravimite tüübist;
  • 8 tundi söömise lõpetamiseks;
  • vältige suurt füüsilist pingutust, rahutusi, stressi.

Te ei saa uuringut läbi viia kohe pärast füsioteraapiat, massaaži, kiirgusdiagnostika meetodeid.

Materjalide kogumise reeglid

Analüüsimiseks võetud veri võetakse ulnarveenist ühekordse nõelaga läbimõõduga 0,8–1,1 mm hommikul tühja kõhuga. Vähemalt 5 ml proov pannakse ühekordselt kasutatavasse Vacuette® tüüpi vaakumtorusse, millel on silt “EDTA-K3”. Mahutil on suletud lilla pistik, mida ei saa avada. Vahetult pärast vere asetamist katseklaasi keeratakse materjal ümber säilitusainega ümber (2–4 korda) ümber.

Kogutud materjali on lubatud hoida temperatuuril + 2... + 8 ° С mitte rohkem kui 3 tundi. Proovid veetakse spetsiaalses konteineris koos külma elemendiga.

Uurimistöö sordid

PCR-meetodil on mitu varianti, mis on ette nähtud sõltuvalt eesmärgist.

Kvaliteedi testimine

C-hepatiidi kvalitatiivne PCR näitab HCV RNA olemasolu või puudumist proovides. Ravim on ette nähtud kõigile patsientidele, kelle esialgne analüüs (ELISA) näitab hepatiidi viiruse antikehade olemasolu. Analüüsiks kasutatud katsesüsteemide tundlikkus varieerub vahemikus 10–500 RÜ / ml. Analüüsi kasutatakse ka viirusevastase ravi efektiivsuse jälgimiseks..

C-hepatiidi PCR (kvalitatiivne analüüs) pole täiesti täpne, kuna negatiivne tulemus ei tähenda, et kehas pole viirust. Võib-olla on selle summa alla katsesüsteemi tundlikkuse läve. Seetõttu tuleb madala viirusekontsentratsiooniga patsientide, näiteks ravil olevate patsientide puhul arvestada testi diagnostilise tundlikkusega ja kasutada sobivat.

Kvantitatiivne reaktsioon

Viiruse koormuse - viiruse RNA koguse vere mahus - määramiseks kasutatakse kvantitatiivset analüüsi. See meetod võimaldab teil diagnoosi kinnitada, kuid ei võimalda tuvastada patoloogia raskust..

Kvantitatiivse uuringu eeliseks on see, et see määrab kindlaks haiguse nakkavuse - mida suurem on patogeeni kontsentratsioon, seda suurem on nakatumise oht. Lisaks mõjutab patogeensete mikroorganismide kontsentratsioon ravi kvaliteeti - väikese koormusega on soodsa tulemuse tõenäosus suurem kui kõrge.

Kvantitatiivse PCR-analüüsi diagnostilise testi tundlikkuse lävi on kõrgem kui kvalitatiivne.

Genotüpiseerimine

C-hepatiidi viirusel on mitu tüve (7 genotüüpi ja 67 alatüüpi). Genotüpiseerimise meetod võimaldab teil tuvastada tuvastatud viiruse tüübi. Genotüübi täpne tuvastamine suurendab ravi efektiivsust, mis on eriti oluline, arvestades viirusevastaste ravimite paljusid kõrvaltoimeid ja vähest taluvust..

Enamikul patsientidest põhjustavad haigust korraga mitut tüüpi viirused. Näiteks põhjustab HCV1b genotüüp 90% juhtudest hepatiidi kroonilist kulgu ja 2 ja 3a 33-50% juhtudest. Genotüübiga patogeeni sissetoomine:

  • Lb põhjustab haiguse raskemat kulgu, millega kaasneb tsirroos või maksavähk, ulatuslik fibroos;
  • 3a-ga kaasneb intensiivne steatoos, sapiteede kahjustus, ALAT-i taseme tõus.

Sellest tulenevalt on vaja tuvastatud tüvega valida ravistrateegia. Seetõttu on genotüpiseerimise eeliseks võime:

  • täpsema ja kvaliteetsema ravitaktika valimine;
  • ravi efektiivsuse hindamine;
  • haiguse kulgu ja protsessi kroonilisuse ennustamine;
  • tüsistuste riskide tuvastamine.

Spetsialist paneb uuringute tulemused vormi tabelisse. Arst tegeleb selle dekodeerimisega, sest lihtne võrdlus normiga ei pruugi alati objektiivset positsiooni kajastada. On vaja analüüsida saadud näitajaid koos vere, biopsia ja ultraheli biokeemilise analüüsi tulemustega.

Tulemuste dešifreerimine

Analüüside dešifreerimiseks tuleb arvestada mitmesuguste uuringute ja kontrollväärtustega. Näiteks kvalitatiivse analüüsi tegemisel võib tulemus olla järgmine:

  • “Avastatud” - kinnitas nakkusetekitaja olemasolu ja haigust;
  • "Pole tuvastatud" - haigust ei kinnitata, viirust ei tuvastata selle puudumise või valesti valitud katsesüsteemi tõttu.

Dešifreeritav kvantitatiivne analüüs aitab normiga võrrelda:

  • „Pole tuvastatud” - HCV puudub, mis võib tähendada, et katsealune on terve või RNA sisaldus proovis on väiksem kui testi tundlikkus;
  • .81,8x10 ^ 2 RÜ / ml - tulemus jääb allapoole kvantitatiivse määramise künnist - on vaja uuesti läbi vaadata ja määrata täiendavad analüüsid;
  • ˂8x10 ^ 5 RÜ / ml - madal HCV koormus näitab ravi efektiivsust;
  • ˃8x10 ^ 5 RÜ / ml - kõrge kontsentratsioon - raviplaani on vaja korrigeerida;
  • , 42,4x10 ^ 7 RÜ / ml - viiruse RNA liiga kõrge kontsentratsioon (üle kvantifitseerimise künnise) nõuab uuringu korduvat uurimist ja analüüsitud materjali lahjendamist.

Genotüpiseerimise tulemusi saab kajastada järgmiselt:

  • “Avastatud” - leiti kindla genotüübiga viirus, samas kui tabel näitab tuvastatud patogeenide genotüüpi ja alatüüpi;
  • “Avastatud” - on tuvastatud viiruse tüvi, mis ei kuulu kõige tavalisemate rühmasse, seetõttu on genotüübi selgitamiseks vaja põhjalikku uuringut;
  • "Pole tuvastatud" - patsient on terve või on HCV sisaldus proovis liiga väike.

Analüüsi kvaliteet sõltub katsesüsteemide õigest valimisest, personali kvalifikatsioonist ja materjali korrektsest valimisest või transportimisest, proovide puhtusest.

Kui palju hepatiidi PCR analüüsi tehakse

HCV RNA analüüsiandmete töötlemine võtab umbes 2 nädalat või 14 tööpäeva. Eradiagnostikakeskustes saab perioodi vähendada mitme päeva võrra..

Millised on tulemused

Mõnel juhul võib lisaks ülaltoodule märkida ka valepositiivseid või valenegatiivseid näitajaid. Seetõttu on soovitatav kinnitada nende täpsus muude diagnostiliste meetodite abil või korrata testi mõne aja pärast..

Mida see tähendab, kui C-hepatiidi PCR on negatiivne ja antikehad on

Vale-negatiivne vastus võib olla järgmine: PCR-i tulemust "ei tuvastata" ja ELISA-tulemust on "positiivne". See võib tähendada, et patsient on hiljuti saanud kollatõve kroonilise vormi ägenemise ja veres on endiselt HCV-vastaseid antikehi.

Kust testida ja kui palju see maksab

C-hepatiidi testid saate teha nii riiklikes kui ka osakondade laborites ja eradiagnostikakeskustes. Viimastes asutustes on diagnoosimine kallim, kuid tulemuse saab varem. Keskmine HCV kvantitatiivse määramise hind PCR abil on 2900 rubla.